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    TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

    • 更新時(shí)間:  2023-07-25
    • 產(chǎn)品型號:  KOD-401
    • 簡單描述
    • TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶
      包裝規(guī)格:200U×1支[200次用]
      現(xiàn)貨*
    詳細(xì)介紹

    TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

    KOD DNA polymerase具有強(qiáng)力的3’→5’核酸外切酶活性(校正活性),可準(zhǔn)確地對目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評。然而,高保真性PCR酶在20?30循環(huán)以后,容易出現(xiàn)擴(kuò)增無法持續(xù)的<停滯現(xiàn)象>。KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶:KOD -Plus-系列技術(shù)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用了本公司新開發(fā)的「延伸增強(qiáng)劑」,保持了KOD -Plus-系列高保真性(約為Taq的80倍)的同時(shí),通過抑制<停滯現(xiàn)象>,明顯提高了對微量模板DNA、長目的片段的擴(kuò)增效率。

    TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

    特征:

    特征1. 可對微量模板DNA進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增
    通過應(yīng)用延伸增強(qiáng)劑技術(shù),即便是微量模板DNA也可對目的基因進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增。同時(shí)本酶具備高保真性(約為Taq的80倍),可準(zhǔn)確地對低拷貝數(shù)模板的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。
    此外,由于使用抗體的
    熱啟動(dòng)法,因此可進(jìn)行特異性良好的擴(kuò)增。


    特征2. 縮短了延伸時(shí)間<30sec./kb> (長目的片段更方便)
    延伸時(shí)間從原產(chǎn)品的60sec./kb縮短到30sec./1kb。對長目的片段的擴(kuò)增更加方便。

    特征3. 實(shí)現(xiàn)了各種引物同一循環(huán)條件
    通過對反應(yīng)Buffer組成的zui適化,與原來的KOD DNA polymerase相比,延伸性?擴(kuò)增效率有了大幅的提升。
    實(shí)現(xiàn)了無需探討循環(huán)條件。20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。無需探討非常簡便。
    *Tm值采用zui鄰近法(Nearest Neighbor method)計(jì)算得到的值。

    特征4. 長目的片段的擴(kuò)增
    提高了延伸性,可對各種長度的目的片段進(jìn)行擴(kuò)增。已通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)可對24kb的基因組DNA 進(jìn)行擴(kuò)增。

     

     實(shí)驗(yàn)例

     

    實(shí)驗(yàn)例1. 對來自Total RNA的各種基因全長ORF的擴(kuò)增
    實(shí)驗(yàn)例2. 微量Template的擴(kuò)增
    實(shí)驗(yàn)例3. 各種長度目的片段的擴(kuò)增效率?延伸性的比較

     

     簡要備注

     

    <幾點(diǎn)建議>
    ●PCR產(chǎn)物的克隆
    由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化,可用平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。
    此時(shí),如已對載體進(jìn)行了脫磷酸化處理,就需要對PCR產(chǎn)物進(jìn)行磷酸化,或使用帶5'磷酸基的引物。 另外,由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化,不能直接進(jìn)行TA克隆。可使用按以下方法開發(fā)的TA克隆試劑盒「
    TArget Clone -Plus-」。

    *包含于TArget Clone -Plus-(Code No. TAK-201)中。
    **推薦使用Ligation high Ver.2 (Code No. LGK-201)。

     

    <注意>
    ●引物的設(shè)計(jì)
    3'端有錯(cuò)配的引物,可能會受本酶校正。

    簡要備注① 關(guān)于Polymerase
    應(yīng)用于PCR的
    DNA polymerase大致可分為2大類。一類是從嗜熱菌中分離出來的被稱為polⅠ型的聚合酶,以TaqTth DNA polymerase為代表。另一類是從超嗜熱Archaea中分離出來的被稱為α型的聚合酶,KOD、Pfu DNA polymerase屬于該類。α型酶具有polⅠ型酶所沒有的3'→5核酸外切酶活性。該活性被稱為Proof-reading(校正)活性,與PCR的保真性有著非常深厚的淵源。KOD DNA polymerase利用該Proof-reading活性,表現(xiàn)出很高的保真性。但具備該活性的酶一般被認(rèn)為對PCR反應(yīng)效率有不好的影響。KOD -Plus- Neo通過應(yīng)用新的延伸增強(qiáng)劑、熱啟動(dòng)法、以及Buffer組分的改良,大大提高了PCR效率。

    Memo② 什么是熱啟動(dòng)?
    在室溫條件下配制PCR反應(yīng)溶液時(shí),配制過程中聚合酶會開始反應(yīng)。在室溫下由于引物的特異性降低,很容易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)等副反應(yīng)。另外,KOD DNA polymerase具有很強(qiáng)的3'→5'核酸外切酶活性(Proof reading活性),這也是產(chǎn)生副反應(yīng)的原因之一。熱啟動(dòng)法是指在高溫階段,激活聚合酶活性的方法,迄今為止已有好多種方法。其中zui嚴(yán)格的是使用中和抗體的方法。
    KOD -Plus- Neo中由于混合了兩種抗Taq DNA polymerase抗體,在常溫狀態(tài)下可*抑制聚合酶的活性及校正活性。而該抑制作用在PCR的預(yù)變性階段*失活,對PCR沒有任何影響。

    訂購信息:

    20U(20次用) 貨號:KOD-401S

    200U(200次用)  貨號:KOD-401

    200U*5支(1000次用) 貨號:KOD-401B

    大量*,*!

     

     


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